一、目的：建立無(wú)菌室中沉降菌的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，保證微生物檢驗(yàn)在規(guī)定潔凈級(jí)別內(nèi)進(jìn)行。
二、范圍：無(wú)菌室的沉降菌的監(jiān)測(cè)。
三、依據(jù)：G家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996。
四、職責(zé)：微生物檢驗(yàn)人員對(duì)本制度的實(shí)施負(fù)責(zé)。
五、內(nèi)容
1、菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡(jiǎn)稱CFU。通常用個(gè)數(shù)表示。
2、測(cè)試方法：沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)48小時(shí)以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)，來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室的潔凈度。
3、所用的儀器和設(shè)備
1）高壓滅菌鍋鍋
2）恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行檢定。
3）培養(yǎng)皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。
4、培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻**約45℃在無(wú)菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。
5、測(cè)試步驟
1）采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。
2）培養(yǎng)，時(shí)間不少于48小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。
3）菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。
6、注意事項(xiàng)
1）測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。
2）采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。
3）對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
4）由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
5）采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
7、測(cè)試規(guī)則
1）測(cè)試狀態(tài)
（1）沉降菌測(cè)試前：被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、必須控制在規(guī)定值內(nèi)。被測(cè)試潔凈室（區(qū)）已消毒。
（2）測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。
（3）測(cè)試人員：測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2個(gè)人。
2）測(cè)試時(shí)間
（1）對(duì)單向流，如100級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開(kāi)始。
（2）對(duì)非單向流，如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開(kāi)始。
8沉降菌計(jì)數(shù)
1）**少采樣點(diǎn)數(shù)目：可按表1確定。在滿足**少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足**少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表2。
表1 **少采樣點(diǎn)數(shù)目
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面積(m2) |
潔凈度級(jí)別 |
|
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100 |
10000 |
100000 |
300000 |
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＜10 |
2～3 |
2 |
2 |
2 |
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≥10～＜20 |
4 |
2 |
2 |
2 |
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≥20～＜40 |
8 |
2 |
2 |
2 |
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≥40～＜100 |
16 |
4 |
2 |
2 |
|
≥100～＜200 |
40 |
10 |
3 |
3 |
注：表中的面積對(duì)于單向流潔凈室是指送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流潔凈室是指房間面積。
表2 **少培養(yǎng)皿數(shù)
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潔凈度級(jí)別 |
所需Φ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5小時(shí)計(jì)） |
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100 |
14 |
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10000 |
2 |
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100000 |
2 |
|
300000 |
2 |
2）采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)測(cè)試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某 局部區(qū)域過(guò)于集中，某局部區(qū)域過(guò)于稀疏。#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
3）記錄：測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試數(shù)據(jù)。
4）結(jié)果計(jì)算：用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見(jiàn)下式：
平均菌落數(shù)m=（m1+m2+……+mn）/n
式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。
5）結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。
6）無(wú)菌室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表3）。
表3
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潔凈級(jí)別 |
100級(jí) |
10000級(jí) |
100000級(jí) |
300000級(jí) |
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標(biāo)準(zhǔn)（平均） |
1個(gè)/皿 |
3個(gè)/皿 |
10個(gè)/皿 |
15個(gè)/皿 |
7）若某潔凈室（區(qū)）的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新測(cè)試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。
主要參考文獻(xiàn)：G家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996
