•2003年的非典疫情及2004年四月G家ＣＤＣ的ＳＡＲＳ實(shí)驗(yàn)室感染事件之后，
生物安全柜的重要性及生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的迫切性已勿須多言。但由于歷史原因及經(jīng)濟(jì)條件的不足，我G在生物安全*域內(nèi)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范相對(duì)薄弱。
•2004年G家制定了《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489-2004，對(duì)在
二級(jí)生物安全柜在現(xiàn)場(chǎng)安裝、移動(dòng)、檢修后等情況下規(guī)定的必測(cè)項(xiàng)目也僅規(guī)定了垂直氣流速度斷面測(cè)定、工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速測(cè)定、煙霧試驗(yàn)、高效空氣過(guò)濾器檢漏試驗(yàn)等幾項(xiàng)指標(biāo),而對(duì)微生物污染模擬試驗(yàn)（挑戰(zhàn)性試驗(yàn)）(KI-Discus 測(cè)試)未作要求,G內(nèi)相關(guān)的試驗(yàn)報(bào)道也不多。為此,我們進(jìn)行了一次現(xiàn)場(chǎng)微生物試驗(yàn),目的在于探討
二級(jí)生物安全柜在現(xiàn)場(chǎng)使用時(shí)各項(xiàng)生物指標(biāo)的安全性.
•參照歐盟標(biāo)準(zhǔn)EN12469-2000 《生物技術(shù)-
生物安全柜技術(shù)要求》和美G標(biāo)準(zhǔn)NSF49-2002《ClassⅡ（層流）
生物安全柜》
•包括三方面的試驗(yàn)：
•1、人員保護(hù)試驗(yàn)
•2、產(chǎn)品保護(hù)試驗(yàn)
•3、交叉污染保護(hù)試驗(yàn)
•
•06年實(shí)施的YY0569-2005《生物安全柜》相關(guān)內(nèi)容基本參照了上述兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)
•1材料和方法
•1.1材料:生物安全柜:
蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)的BHC-ⅡB2型生物安全柜;試驗(yàn)菌株: 枯草桿菌芽孢ATCC9372
•1.2方法
•1.2.1：交叉污染測(cè)試：確定安全柜在防止產(chǎn)品在同一工作室內(nèi)互相細(xì)菌傳播污染的保護(hù)功效。見(jiàn)圖1
•試驗(yàn)用圓筒的設(shè)置：在安全柜操作臺(tái)面的中央放置一直徑100mm的不銹鋼圓筒,模擬實(shí)驗(yàn)時(shí)操作人員的手臂，一端緊靠安全柜的后壁，一端伸出安全柜工作窗150mm。
•噴霧器的設(shè)置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×104/ml）的噴霧器置于安全柜左側(cè)面中央離操作臺(tái)面向上100mm處，噴霧器背面緊靠?jī)?nèi)壁。培養(yǎng)皿的設(shè)置：在噴霧器噴嘴的下方臺(tái)面往右側(cè)方向排列兩個(gè)對(duì)照皿，緊靠對(duì)照皿右側(cè)排三列φ90mm試驗(yàn)皿。每列5個(gè)。見(jiàn)圖
•采樣程序：安全柜運(yùn)行30min后開(kāi)始試驗(yàn)。取下培養(yǎng)皿蓋子，啟動(dòng)噴霧器噴菌5min，噴菌量≥1ml/分鐘。噴霧器停止5min后，將培養(yǎng)皿蓋上。
•細(xì)菌培養(yǎng)：培養(yǎng)皿及對(duì)照皿在37℃環(huán)境中培養(yǎng)48h計(jì)算菌落數(shù)。
•在安全柜操作臺(tái)右側(cè)同樣方法重復(fù)一遍。
•1.2.2、產(chǎn)品保護(hù)測(cè)試：確定如果細(xì)菌釋放于工作室外，安全柜內(nèi)部是否會(huì)受污染。見(jiàn)圖2
•試驗(yàn)用圓筒的設(shè)置：同1.1.1。
•噴霧器的設(shè)置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×106/ml）的噴霧器置于安全柜操作窗外側(cè)的水平中心，水平噴射軸在工作臺(tái)面向上350mm處，平行于工作面，噴嘴距工作窗外側(cè)100mm，并朝向工作窗。
•培養(yǎng)皿的設(shè)置：將40個(gè)φ90mm培養(yǎng)皿放置在安全柜臺(tái)面實(shí)驗(yàn)用圓筒中軸線兩側(cè)（每側(cè)4列共20個(gè)平皿），另將1個(gè)對(duì)照皿放置于工作區(qū)前回風(fēng)凹槽的上方。
•采樣程序：安全柜運(yùn)行30min后開(kāi)始試驗(yàn)。取下培養(yǎng)皿蓋子，噴菌5min，噴菌量≥1ml/分鐘。噴霧器停止5min后，將培養(yǎng)皿蓋上。
•細(xì)菌培養(yǎng)：培養(yǎng)皿及對(duì)照皿在37℃環(huán)境中培養(yǎng)48h計(jì)算平均菌落數(shù)。
•1.2.3、人員保護(hù)試驗(yàn)：確定如果在工作室內(nèi)有細(xì)菌被釋放時(shí)，安全柜對(duì)此的密封保護(hù)性。
•試驗(yàn)圓筒的設(shè)置：同1.2.1，圓筒中心軸下方、位于前窗操作口進(jìn)分隔刪的上方放置一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照皿。
•噴霧器的設(shè)置：將含有55ml枯草桿菌芽孢菌混懸液（5×108/ml）的噴霧器置于操作柜內(nèi)左右內(nèi)壁的中央，水平噴射軸在工作臺(tái)面上方350mm處，平行于工作面。噴霧器的噴嘴距工作窗內(nèi)側(cè)100mm處朝向工作臺(tái)。噴菌量≥1ml/分鐘。
•撞擊采樣器的設(shè)置：操作窗外測(cè)人員所在區(qū)域設(shè)6個(gè)撞擊式采樣器，空氣采樣量為12.5升/分鐘。內(nèi)盛20ml無(wú)菌蒸餾水，采樣口設(shè)置在安全柜工作窗外側(cè)63mm處。其中兩個(gè)采樣口的軸心線相隔150mm,分別位于試驗(yàn)圓筒的兩側(cè)并于試驗(yàn)圓筒等高；兩個(gè)采樣器的軸心線相隔50mm，分列試驗(yàn)圓筒的兩側(cè)于圓筒下沿30mm的 水平面上，另兩個(gè)采樣器軸心線相距300mm，水平面位于工作臺(tái)面向上360mm。兩個(gè)狹縫采樣器的設(shè)置：采樣口與安全柜工作臺(tái)面齊平，垂直軸線距安全柜操作窗向外150mm，分別距左右兩側(cè)的內(nèi)壁200mm。內(nèi)置φ150mm的培養(yǎng)皿各一個(gè)，空氣采樣量為28.3升/分鐘。見(jiàn)圖三
•采樣程序：生物安全柜運(yùn)行30min后開(kāi)始試驗(yàn)。采樣程序見(jiàn)表1：
•表1：采樣程序
•時(shí)間（min） 試驗(yàn)步驟
0 開(kāi)啟狹縫采樣器
5 開(kāi)啟噴霧器
6 開(kāi)啟撞擊采樣器
11 停止撞擊采樣器
11.5 停止噴霧器
30 停止狹縫采樣器
•細(xì)菌培養(yǎng)：采樣后所有撞擊采樣器的采樣液在無(wú)菌條件下用一直徑47mm孔徑為0.22μm的濾膜過(guò)濾后，取出濾膜置于有營(yíng)養(yǎng)瓊脂的φ90mm的培養(yǎng)皿。把置有過(guò)濾膜的培養(yǎng)皿、兩個(gè)狹縫采樣器的培養(yǎng)皿及對(duì)照培養(yǎng)皿在37℃環(huán)境中培養(yǎng)48h讀菌落數(shù)。
•每次試驗(yàn)之間對(duì)操作臺(tái)內(nèi)外用1％過(guò)氧乙酸溶液擦拭15分鐘，安全柜運(yùn)行30分鐘以上。試驗(yàn)重復(fù)三次.
•2結(jié)果和討論：培養(yǎng)48小時(shí)后計(jì)算平均菌落數(shù)，見(jiàn)表2
• 表2： 檢測(cè)結(jié)果
• 檢測(cè)項(xiàng)目 實(shí)測(cè)值 陽(yáng)性對(duì)照
1： 交叉污染測(cè)試
細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/每次） ＜1、 ＜1 1140、900
2：產(chǎn)品保護(hù)測(cè)試
細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/每次） ?。? 1080
3：人員保護(hù)測(cè)試
撞擊式樣采樣器
細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/每次） 2 1680
狹縫式采樣器
細(xì)菌菌落總數(shù)（CFU/每次） ＜1 1 1680
•雖然安全柜的安全性可以通過(guò)常量氣流和過(guò)濾測(cè)試來(lái)獲取相關(guān)數(shù)據(jù),但在實(shí)際使用中卻未必能發(fā)揮令人滿意的效果，因此，以上三個(gè)微生物測(cè)試評(píng)估顯得很重要。我們通過(guò)對(duì)安全柜進(jìn)行的模擬噴菌試驗(yàn),獲取了相關(guān)信息,按美G標(biāo)準(zhǔn)NSF49-2002和歐盟標(biāo)準(zhǔn)EN12469-2000,在人員保護(hù)試驗(yàn)中,撞擊式采樣器的菌落總數(shù)應(yīng)≤10CFU/每次，狹縫式采樣器菌落總數(shù)應(yīng)≤5CFU/每次，產(chǎn)品保護(hù)護(hù)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)為菌落總數(shù)≤5CFU/每次，交叉污染試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)為≤2CFU/每次，本次試驗(yàn)的結(jié)果表明G產(chǎn)生物安全柜在安全性方面已達(dá)到了G際通用要求。
